| تعداد تست | 50 preps |
|---|---|
| وضعیت مجوز | دارای مجوز IVD |
| نوع نمونه | ادرار, باکتری, خون کامل, سرم / پلاسما, مدفوع |
| نوع بیماری / کاربرد | بیماریهای عفونی, تحقیقات و پژوهش |
| روش استخراج | ستونی |
| هدف استخراج | DNA |
4400000 تومان
| نوع نمونه | نمونه خون ، سرم ، CSF ، BAL ، خلط و غیره |
| نوع اسید نوکلئیک | DNA انواع باکتری های گرم مثبت ، گرم منفی ، اسید فست ، مخمر و قارچ |
کیت استخراج DNA از باکتری BehPrep Bacterial DNA Extraction Kit جهت استخراج DNA از باکتری های گرم مثبت، گرم منفی و اسیدفاست با بازدهی بالا و مراحل بهینه طراحی شده است. این کیت، امکان استخراج DNA باکتريایی از انواع نمونه های زيستی مانند خون، سرم، CSF، BAL، ادرار، مدفوع، خلط، و نمونه های کشت داده شده در محیط های جامد و مایع را فراهم می کند.
فرآیند این کیت استخراج DNA به گونه ای طراحی شده است که ابتدا با استفاده از یک بافر لایز قوی و آنزیم لیزوزیم، دیواره سلولی مقاوم باکتری ها به طور کامل شکسته شود. با توجه به تفاوت در ساختار دیواره باکتری های گرم مثبت و منفی و همچنین باکتری های اسیدفاست، ترکیب ویژه ای از مواد لیز کننده برای تسهیل لایز و آزادسازی DNA به کار رفته است که این امر باعث افزایش بازدهی استخراج از انواع باکتری ها می شود.
پس از مرحله لایز، DNA آزاد شده با اضافه کردن (بافر) مخصوص به غشای سیلیکایی موجود در ستون متصل می شود. شرایط تنظیم شده برای pH و غلظت نمکی در این مرحله، پیوند قوی DNA به غشای سیلیکایی را تضمین می کند، در حالی که سایر ترکیبات سلولی و ناخالصی ها از ستون عبور کرده و جدا میشوند.
در مراحل بعد، ستون حاوی DNA با استفاده از بافرهای شستشوی مؤثر دو مرحلهای، به دقت شسته می شود تا هرگونه آلودگی پروتئینی، نمکی و دیگر مواد اضافی از سطح غشا حذف گردد. این شستشوها به گونه ای طراحی شده اند که نیاز به اضافه کردن اتانول ندارند، که این ویژگی موجب افزایش سرعت و سهولت کار با کیت می شود.
در مرحله نهایی، DNA خالص شده با استفاده از یک بافر شستشوی نهایی (Elution Buffer) یا آب DNase free از غشای سیلیکایی آزاد میشود. DNA به دست آمده دارای خلوص بالا، بدون آلودگیهای پروتئینی آنزیمی و با کیفیت مناسب برای انواع کاربردهای مولکولی است.
کاربرد DNA استخراج شده از این کیت استخراج DNA از باکتری شامل توالی یابی، Blotting، PCR و برش آنزیمی است که با کمترین میزان آلودگی و مهارکنندههای PCR باعث میشود این DNA برای تحقیقات ژنتیکی و مولکولی مانند تشخیص باکتری های بیماری زا و شناسایی ژنهای مقاوم به آنتی بیوتیک ها بسیار مناسب باشد.
| تعداد تست | 50 preps |
|---|---|
| وضعیت مجوز | دارای مجوز IVD |
| نوع نمونه | ادرار, باکتری, خون کامل, سرم / پلاسما, مدفوع |
| نوع بیماری / کاربرد | بیماریهای عفونی, تحقیقات و پژوهش |
| روش استخراج | ستونی |
| هدف استخراج | DNA |
.فقط مشتریانی که این محصول را خریداری کرده اند و وارد سیستم شده اند میتوانند برای این محصول دیدگاه(نظر) ارسال کنند.
این کیت برای استخراج DNA باکتریهای گرم منفی، گرم مثبت و باکتریهای اسید فاست (Acid-Fast) طراحی شده است. نمونههای قابل استفاده شامل مایعات زیستی بدن (سرم، پالسما، CSF)، خون، ادرار، مدفوع، خلط (Sputum)، BAL، نمونههای Liquid-Based، سوآپهای چشمی، بینی و حلق، و همچنین محیطهای کشت جامد و مایع میباشد.
بازدهی استخراج DNA از تعداد ۲×۱۰⁹ باکتری، به طور کلی معادل ۵ تا ۱۰ میکروگرم (µg) DNA میباشد. کیفیت DNA استخراجشده از خلوص بالایی برخوردار بوده و نسبت جذب A260/A280 آن در محدوده ۱.۸ تا ۱.۹ قرار میگیرد.
بله. باکتریهای گرم مثبت به دلیل دارا بودن دیواره سلولی ضخیم و چندلایه، نیاز به پیشتیمار با آنزیم لیزوزیم دارند. در این کیت، برای باکتریهای گرم مثبت، مرحله انکوباسیون با بافر Lyso و آنزیم لیزوزیم به مدت حداقل ۱ ساعت در دمای ۳۷ درجه سانتیگراد در نظر گرفته شده است. برای باکتریهای گرم منفی، این مرحله حذف شده و فرایند مستقیماً با بافر BT و پروتئیناز K آغاز میشود.
ستونها و تمامی بافرها در دمای اتاق (۱۸ تا ۲۵ درجه سانتیگراد) تا پایان تاریخ انقضا پایدار هستند. تأکید میشود که نگهداری بافرها در یخچال (۲-۸ درجه) یا فریزر (۱۵- تا ۲۵- درجه) به دلیل تشکیل رسوب، تأثیر منفی بر عملکرد کیت خواهد داشت. پروتئیناز K و لیزوزیم پس از آمادهسازی باید در دمای ۲۰- درجه سانتیگراد نگهداری شوند.
پروتئیناز K: به ازای هر ویال ۴ میلیگرمی، مقدار ۲۰۰ میکرولیتر از بافر PK اضافه شده و به مدت ۲۰ ثانیه ورتکس میگردد.
لیزوزیم: به ازای هر ویال ۱۰ میلیگرمی، مقدار ۲۰۰ میکرولیتر از بافر Lyso اضافه شده و به مدت ۲۰ ثانیه ورتکس میشود.
بافر Binding: به ازای هر ۴ میلیلیتر بافر Binding، مقدار ۷ میلیلیتر اتانول ۹۶ یا ۱۰۰ درصد اضافه شده و به خوبی مخلوط میگردد.
بله. در مرحله الوشن (Elution) با بافر EB، راهکارهای زیر باعث افزایش بازده میشود:
افزایش زمان انکوباسیون با بافر EB بیش از ۵ دقیقه قبل از سانتریفیوژ.
انکوبه کردن ستون با درب بسته در دمای ۶۰ درجه سانتیگراد.
تکرار مرحله الوشن با بافر EB رد شده از ستون برای بار دوم که باعث افزایش ۲۰ تا ۵۰ درصدی میزان DNA استخراجی میگردد.
استفاده از حجم کمتر از ۷۰ میکرولیتر بافر EB باعث افزایش غلظت DNA در مایع عبوری میشود، اما میزان کل DNA استخراجشده را کمی کاهش میدهد. شستشوی غشاء با حجم کمتر از ۵۰ میکرولیتر بافر EB توصیه نمیشود، زیرا باعث کاهش قابلتوجه میزان DNA استخراجشده میگردد.
دلایل اصلی کاهش غلظت عبارتند از:
ناکافی بودن نمونه اولیه: استفاده از حجم نمونه بیشتر.
الیز نامناسب: افزایش زمان انکوباسیون با بافر BT تا ۱ ساعت یا انکوباسیون overnight.
عملکرد نامناسب پروتئیناز K: اطمینان از نگهداری در دمای ۲۰- درجه و آمادهسازی مجدد.
عبور نکردن کامل محلول از ستون: افزایش زمان یا سرعت سانتریفیوژ و حذف رسوب قبل از انتقال به ستون.
DNA استخراجشده با این کیت از کیفیت و خلوص بالایی برخوردار بوده و برای کاربردهای حساس مولکولی نظیر واکنش زنجیرهای پلیمراز (PCR)، Real-Time PCR، توالییابی (Sequencing) و سایر آزمایشهای تشخیصی مولکولی مناسب میباشد.
انجام مرحله شستشو با بافر WB2 و سپس خشککردن کامل ستون با سانتریفیوژ در حداکثر سرعت (۱۳۰۰۰ دور در دقیقه به مدت ۳ دقیقه) کاملاً الزامی است. این عمل باعث حذف کامل نمکها و باقیماندههای بافر شستشو از غشاء میشود. در غیر این صورت، هرگونه باقیمانده بافر WB2 میتواند بهعنوان مهارکننده (Inhibitor) در فرآیندهای مولکولی بعدی نظیر PCR عمل کرده و نتایج را تحت تأثیر قرار دهد. همچنین تکرار مرحله شستشو با WB2 (مرحله ۸ در فرایند) جهت افزایش خلوص DNA ضروری میباشد.
نقد و بررسیها
هنوز بررسیای ثبت نشده است.