| تعداد تست | 100 preps |
|---|---|
| وضعیت مجوز | دارای مجوز IVD |
| نوع نمونه | ادرار, بافت, باکتری, خون کامل, سرم / پلاسما, سواب, مدفوع, ویروس |
| نوع بیماری / کاربرد | بیماریهای ژنتیکی, بیماریهای عفونی, بیماریهای ویروسی, تحقیقات و پژوهش |
| روش استخراج | ستونی |
| هدف استخراج | DNA |
7900000 تومان
| نوع نمونه | نمونه خون، مايعـات بدن ، سرم و پلاسما، بافت و غيره |
| نوع اسید نوکلئیک | DNA ژنومیک ، DNA ويروسی وباکتريايی |
کیت استخراج ستونی BehPrep G-Plus DNA با متد آسان و بازده بالا جهت استخراج DNA ژنومیک به روش ستونی از طیف گستردهای از نمونههای بیولوژیک شامل خون محیطی، بافی کوت، سلولهای دهانی، نمونههای سرم و پلاسما، سلولهای کشت داده شده، بافت، نمونههای ویروسی، باکتریایی و قارچی طراحی شده است.بکارگیری بافر لایز قوی موجب عملکرد عالی این محصول در استخراج DNA از باکتریهای گرم مثبت و بافتهای سخت میشود. نوکلئیک اسید پس از لایز سلول و آزادسازی، در غلظت نمکی بهینه به غشای سیلیکایی ستون متصل میشود و آلودگیهای نمکی، پروتئینی و بقایای لایز سلولی طی دو مرحله شستشوی مؤثر از غشای ستون جدا میشوند. همچنین، بافرهای شستشو در این کیت آماده مصرف میباشند و نیاز به افزودن اتانول نخواهند داشت. همچنین نوکلئیک اسید استخراج شده، دارای خلوص بالا، کمترین میزان آلودگی و مهارکنندههای PCR است، از این رو مناسب جهت کاربردهای مولکولی نظیر RT-PCR و توالییابی (NGS) میباشد.
از دیگر ویژگیهای متمایزکنندهٔ این کیت استخراج ستونی، اختصاصیت بالا در استخراج DNA سویههای مختلف ویروس HPV از نمونههای واژینال میباشد.
| تعداد تست | 100 preps |
|---|---|
| وضعیت مجوز | دارای مجوز IVD |
| نوع نمونه | ادرار, بافت, باکتری, خون کامل, سرم / پلاسما, سواب, مدفوع, ویروس |
| نوع بیماری / کاربرد | بیماریهای ژنتیکی, بیماریهای عفونی, بیماریهای ویروسی, تحقیقات و پژوهش |
| روش استخراج | ستونی |
| هدف استخراج | DNA |
.فقط مشتریانی که این محصول را خریداری کرده اند و وارد سیستم شده اند میتوانند برای این محصول دیدگاه(نظر) ارسال کنند.
این کیت یک کیت جامع و کامل بوده و برای استخراج DNA از طیف وسیعی از نمونهها طراحی شده است. نمونههای قابل استفاده عبارتند از: خون محیطی (تازه و منجمد)، مایعات بدن، بافیکوت، سلولهای دهانی، بزاق، خون خشک شده (DBS)، بافت تازه، بافت پارافینه، سلولهای کشتدادهشده، نمونههای باکتریایی (گرم منفی و گرم مثبت)، نمونههای ویروسی (از مایعات بدن، مدفوع، سوآپ و نمونههای Liquid-Based) و همچنین نمونههای BAL، CSF، خلط و سوآپهای چشمی، بینی و حلق.
میزان DNA استخراجشده به نوع نمونه بستگی دارد:
از خون و مایعات بدن: ۳ تا ۱۲ میکروگرم (µg) DNA با نسبت A260/A280 بین ۱.۸ تا ۱.۹
از بافت (mg 25): ۱۰ تا ۳۰ میکروگرم DNA با نسبت A260/A280 بین ۱.۸ تا ۱.۹
از سلولهای دهانی: ۰.۵ تا ۳.۵ میکروگرم DNA با نسبت A260/A280 بین ۱.۷ تا ۱.۹
DNA استخراجشده قابل برش توسط آنزیمهای محدودکننده بوده و برای کاربردهای مولکولی نظیر PCR و Southern Blot مناسب میباشد.
ستونها و تمامی بافرها در دمای اتاق (۱۸ تا ۲۵ درجه سانتیگراد) تا پایان تاریخ انقضا پایدار هستند. تأکید میشود که نگهداری بافرها در یخچال (۲-۸ درجه) یا فریزر (۱۵- تا ۲۵- درجه) به دلیل تشکیل رسوب، تأثیر منفی بر عملکرد کیت خواهد داشت. پروتئیناز K پس از آمادهسازی باید در دمای ۲۰- درجه سانتیگراد نگهداری شود. همچنین NA Carrier پس از آمادهسازی در دمای ۲۰- درجه سانتیگراد نگهداری شده و از تکرار چرخه انجماد/ذوب بیش از ۳ بار خودداری گردد.
پروتئیناز K: به ازای هر ویال ۴ میلیگرمی، مقدار ۲۰۰ میکرولیتر از بافر PK اضافه شده و به مدت ۲۰ ثانیه ورتکس میگردد. آنزیم پس از آمادهسازی باید در دمای ۲۰- درجه سانتیگراد نگهداری شود.
NA Carrier: میزان ۳۲۰ میکرولیتر بافر EB به تیوب حاوی ۳۲۰ میکروگرم Carrier NA لیوفیلیزه اضافه شده و کاملاً همگن میگردد. به ازای هر نمونه، میزان ۳ میکرولیتر از محلول Carrier NA به ۲۰۰ میکرولیتر بافر HL اضافه میشود.
سایر بافرهای این کیت آماده مصرف میباشند.
۵- حداقل حجم نمونه خون و مایعات بدن برای استخراج DNA چقدر است؟
حجم استاندارد نمونه خون برای استخراج، ۲۰۰ میکرولیتر میباشد. استفاده از حجم کمتر از ۲۰۰ میکرولیتر توصیه نمیشود. در صورت در دسترس بودن حجم کمتر، میتوان با افزودن بافر PBS حجم نمونه را به ۲۰۰ میکرولیتر رساند. همچنین روش اختصاصی برای استخراج از ۴۰۰ میکرولیتر خون محیطی جهت دستیابی به DNA با غلظت بیشتر (بیش از ۲۰۰ میکروگرم بر میلیلیتر) بهینهسازی شده است.
حجم استاندارد بافر EB برای الوشن در نمونههای مختلف:
خون، مایعات بدن، بافت و سلولهای دهانی: ۷۰ میکرولیتر
نمونههای ویروسی، مدفوع و سوآپ: ۶۰ میکرولیتر
استفاده از حجم کمتر از مقدار استاندارد باعث افزایش غلظت DNA در مایع عبوری میشود، اما میزان کل DNA استخراجشده را اندکی کاهش میدهد. شستشوی غشاء با حجم کمتر از ۵۰ میکرولیتر توصیه نمیشود. افزایش زمان انکوباسیون با بافر EB بیش از ۵ دقیقه و انکوبه کردن ستون با درب بسته در دمای ۶۰ درجه سانتیگراد، باعث افزایش راندمان استخراج میشود.
بله. در صورت تکرار مرحله الوشن با بافر EB رد شده از ستون برای بار دوم، میزان DNA استخراجی ۲۰ تا ۵۰ درصد افزایش خواهد یافت. همچنین افزایش زمان انکوباسیون با بافر EB بیش از ۵ دقیقه و انجام انکوباسیون در دمای ۶۰ درجه سانتیگراد با درب بسته، از دیگر راهکارهای افزایش بازده میباشد.
NA Carrier (حامل اسید نوکلئیک) در فرآیند استخراج DNA ویروسی کاربرد دارد. این ماده به منظور افزایش بازده استخراج اسیدهای نوکلئیک از نمونههایی با بار ویروسی پایین به بافر HL اضافه میشود. Carrier NA به عنوان حامل عمل کرده و با اتصال به اسیدهای نوکلئیک هدف، میزان بازیابی آنها را افزایش میدهد. این ماده به ویژه در استخراج DNA ویروسی از مایعات بدن، مدفوع و سوآپها ضروری میباشد.
باکتریهای گرم منفی: رسوب باکتریایی با بافر TL و پروتئیناز K در دمای ۵۶ درجه به مدت ۲۰ دقیقه و سپس در دمای ۷۰ درجه به مدت ۱۰ دقیقه انکوبه میشود. سپس بافر HL و اتانول اضافه شده و مراحل ستونی ادامه مییابد.
باکتریهای گرم مثبت: به دلیل دیواره سلولی ضخیمتر، ابتدا رسوب باکتریایی در بافر Lyso و آنزیم لیزوزیم به مدت حداقل ۱ ساعت در دمای ۳۷ درجه انکوبه میشود. سپس پس از سانتریفیوژ، مایع رویی خارج شده و فرایند مشابه باکتریهای گرم منفی ادامه مییابد.
دلایل اصلی کاهش غلظت و راهکارهای مربوطه عبارتند از:
کافی نبودن نمونه: استفاده از بافیکوت برای نمونههای خون کملوکوسیت
الیز نامناسب: افزایش زمان انکوباسیون با بافر TL (تا ۳ ساعت یا overnight) و مخلوط کردن کامل نمونه با ورتکس
عبور نکردن کامل محلول از ستون: افزایش زمان یا سرعت سانتریفیوژ و حذف رسوب قبل از انتقال به ستون
عملکرد نامناسب پروتئیناز K: اطمینان از نگهداری در دمای ۲۰- درجه و آمادهسازی مجدد
نگهداری نمونه در شرایط نامناسب: خودداری از استفاده از نمونههای با چرخه انجماد-ذوب مکرر
مسدود شدن غشاء ستون: خودداری از استفاده از بافرهای دارای رسوب و رعایت حجم مجاز نمونه
نقد و بررسیها
هنوز بررسیای ثبت نشده است.