| تعداد تست | 100 preps |
|---|---|
| نوع نمونه | خون کامل, سرم / پلاسما |
| نوع بیماری / کاربرد | بیماریهای ژنتیکی, تحقیقات و پژوهش, سرطان |
| روش استخراج | ستونی |
| هدف استخراج | DNA |
6700000 تومان
| نوع نمونه | نمونه خون ، مایعات بدن ، سلول های دهانی و غیره |
| نوع اسید نوکلئیک | DNA ژنومیک |
| غلظت | 50-100 ng/μl از 200 میکرولیتر نمونه اولیه |
کیت استخراج ستونی BehPrep Genomic DNA جهت استخراج DNA ژنومیک با خلوص بالا از خون و مایعات بدن، بافی کوت و سلولهای دهانی طراحی شده است. در این روش نوکلئیک اسید در غلظت نمکی و pH مشخص به غشای سیلیکایی ستون متصل شده و آلودگیهای نمکی و پروتئینی در طی دو مرحله شستشوی مؤثر از غشای سیلیکایی ستون عبور میکنند. بافرهای شستشوی بکار رفته در این کیت جهت تسریع فرآیند نیاز به افزودن اتانول نخواهد داشت. در مرحله آخر نوکلئیک اسید استخراج شده در نتیجه شستشو بهوسیله بافر EB از غشای سیلیکایی جدا میشود. این کیت استخراج ستونی تحت استاندارد ISO13485 تولید شده است و DNA ژنومیک استخراج شده جهت استفاده در کاربردهای مولکولی مانند PCR، qPCR، RFLP، کلونینگ و آمادهسازی نمونه برای تکنیک توالییابی مناسب میباشد.
| تعداد تست | 100 preps |
|---|---|
| نوع نمونه | خون کامل, سرم / پلاسما |
| نوع بیماری / کاربرد | بیماریهای ژنتیکی, تحقیقات و پژوهش, سرطان |
| روش استخراج | ستونی |
| هدف استخراج | DNA |
.فقط مشتریانی که این محصول را خریداری کرده اند و وارد سیستم شده اند میتوانند برای این محصول دیدگاه(نظر) ارسال کنند.
این کیت برای استخراج DNA ژنومیک از نمونههای خون محیطی (تازه و منجمد)، مایعات بدن، بافیکوت (Buffy Coat) و سلولهای دهانی (Buccal Cell) به روش ستونی طراحی و بهینهسازی شده است.
میزان DNA استخراجشده به تعداد گلبولهای سفید خون بستگی دارد. به طور کلی از نمونه خون، بازده نهایی DNA معادل ۳ تا ۱۲ میکروگرم (µg) با نسبت جذب A260/A280 در محدوده ۱.۸ تا ۱.۹ (نشاندهنده خلوص بالا) میباشد. از یک سوآب سلولهای دهانی، بازده ۰.۵ تا ۳.۵ میکروگرم با کیفیت ۱.۷ تا ۱.۹ قابل استحصال است. DNA استخراجشده قابل برش توسط آنزیمهای محدودکننده بوده و برای کاربردهای مولکولی نظیر PCR و Southern Blot مناسب میباشد.
ستونها و تمامی بافرها در دمای اتاق (۱۸ تا ۲۵ درجه سانتیگراد) تا پایان تاریخ انقضا پایدار هستند. تأکید میشود که نگهداری بافرها در یخچال (۲-۸ درجه) یا فریزر (۱۵- تا ۲۵- درجه) به دلیل تشکیل رسوب، تأثیر منفی بر عملکرد کیت خواهد داشت. پروتئیناز K پس از آمادهسازی باید در دمای ۲۰- درجه سانتیگراد نگهداری شود.
به ازای هر ویال ۴ میلیگرمی پروتئیناز K، مقدار ۲۰۰ میکرولیتر از بافر PK اضافه شده و به مدت ۲۰ ثانیه به خوبی ورتکس میگردد. آنزیم پروتئیناز K پس از آمادهسازی، آماده مصرف میباشد و باید در دمای ۲۰- درجه سانتیگراد نگهداری شود. سایر بافرهای این کیت آماده مصرف میباشند.
بله. برای استخراج DNA از خون فریز شده، ابتدا نمونه از فریزر خارج شده و قبل از ذوب شدن، مقدار ۳ برابر حجم خون، بافر Lysis RBC به آن اضافه میشود. سپس نمونه تا زمان ذوب کامل در شیکر دورانی قرار داده میشود. پس از سانتریفیوژ و حذف مایع رویی، رسوب در بافر PBS سرد حل شده و فرایند استخراج ادامه مییابد. لازم به ذکر است که راندمان استخراج از خون فریز شده به دلیل الیز برخی از لوکوسیتها در هنگام فریز شدن، نسبت به خون تازه ممکن است کمتر باشد.
حجم استاندارد نمونه خون برای استخراج، ۲۰۰ میکرولیتر میباشد. استفاده از حجم کمتر از ۲۰۰ میکرولیتر توصیه نمیشود. در صورت در دسترس بودن حجم کمتر، میتوان با افزودن بافر PBS حجم نمونه را به ۲۰۰ میکرولیتر رساند. همچنین روش اختصاصی برای استخراج از ۴۰۰ میکرولیتر خون محیطی جهت دستیابی به DNA با غلظت بیشتر (بیش از ۲۰۰ میکروگرم بر میلیلیتر) بهینهسازی شده است.
حجم استاندارد بافر EB برای الوشن، ۷۰ میکرولیتر میباشد. استفاده از حجم کمتر از ۷۰ میکرولیتر باعث افزایش غلظت DNA در مایع عبوری میشود، اما میزان کل DNA استخراجشده را اندکی کاهش میدهد. شستشوی غشاء با حجم کمتر از ۵۰ میکرولیتر توصیه نمیشود. افزایش زمان انکوباسیون با بافر EB بیش از ۵ دقیقه قبل از سانتریفیوژ و انکوبه کردن ستون با درب بسته در دمای ۶۰ درجه سانتیگراد، باعث افزایش راندمان استخراج DNA میشود.
بله. در صورت تکرار مرحله الوشن با بافر EB رد شده از ستون برای بار دوم، میزان DNA استخراجی ۲۰ تا ۵۰ درصد افزایش خواهد یافت. همچنین افزایش زمان انکوباسیون با بافر EB بیش از ۵ دقیقه و انجام انکوباسیون در دمای ۶۰ درجه سانتیگراد با درب بسته، از دیگر راهکارهای افزایش بازده میباشد.
دلایل اصلی کاهش غلظت و راهکارهای مربوطه عبارتند از:
کافی نبودن نمونه: برای نمونههای خون کملوکوسیت، از بافیکوت استفاده شود.
الیز نامناسب: افزایش زمان انکوباسیون با بافر GLB و مخلوط کردن کامل نمونه با ورتکس
عبور نکردن کامل محلول از ستون: افزایش زمان یا سرعت سانتریفیوژ و حذف رسوب قبل از انتقال به ستون
عملکرد نامناسب پروتئیناز K: اطمینان از نگهداری در دمای ۲۰- درجه و آمادهسازی مجدد
نگهداری نمونه در شرایط نامناسب: خودداری از استفاده از نمونههای با چرخه انجماد-ذوب مکرر و نمونههای نگهداری شده طولانیمدت
DNA استخراجشده با این کیت از کیفیت و خلوص بالایی برخوردار بوده، قابل برش توسط آنزیمهای محدودکننده میباشد و برای کاربردهای مولکولی نظیر واکنش زنجیرهای پلیمراز (PCR)، Southern Blot و سایر آزمایشهای تشخیصی مولکولی مناسب است.
نقد و بررسیها
هنوز بررسیای ثبت نشده است.