پروتئیناز K

Proteinase K

آنزیم پروتئیناز K: یک پروتئاز سرین همه کاره برای زیست شناسی مولکولی

Proteinase K یک پروتئاز سرین چند منظوره است که در قارچ Parengyodontium یافت می‌شود. این آنزیم به خاطر توانایی اش در از بین بردن مو (‏keratin)‏ مشهور است، به همین دلیل است که آن را پروتئیناز K می‌نامند.

این آنزیم در درجه اول پیوندهای پپتیدی را در نزدیکی گروه کربوکسیل اسیدهای آمینه آلیفاتیک و آروماتیک با گروه های آلفا آمینه مسدود شده می شکافد. پروتئیناز K که عضوی از خانواده پپتیداز S8 است، دارای وزن مولکولی ۲۸۹۰۰ دالتون است.

کاربردهای پروتئیناز K در آماده سازی اسید نوکلئیک

پروتیناز K معمولا در زیست‌شناسی مولکولی برای حذف آلودگی پروتئین و هضم پروتئین‌ها در آماده‌سازی اسید نوکلئیک به کار می‌رود. این آنزیم به طور موثر نوکلئازها را غیر فعال می‌کند که می‌توانند DNA یا RNA را در طول خالص‌سازی تجزیه کنند.

همچنین چیزی که این آنزیم را متمایز می­کند، توانایی آن برای فعال ماندن در حضور عوامل دناتوره کننده مانند SDS و اوره و همینطور عوامل chelating مانند EDTA، معرف‌های سولفیدریل، و همچنین بازدارنده‌های تریپسین یا کیموتریپسین است. از پروتئیناز K اغلب برای تخریب پروتئین‌ها در لیزهای سلولی و آزاد ساز اسیدنوکلئیک استفاده می‌شود; چون به طور موثر DNase ها و RNase ها را غیر فعال می‌کند.

پروتئیناز K: فعال سازی، پایداری و فعالیت پروتئولیتیک

پروتئیناز K، توسط یون‌های کلسیم فعال می‌شود. یون‌های کلسیم فعالیت آنزیم را تحت‌تاثیر قرار نمی‌دهند، اما به پایداری آن کمک می‌کنند. علاوه بر این، زمان طولانی انکوباسیون و غلظت بالای پروتئاز منجر به هضم کامل پروتئین می‌شود. در حالی که حذف یون‌های کلسیم پایداری آنزیم را کاهش می‌دهد، اما تاثیر قابل‌توجهی بر فعالیت proteolytic ندارد. برای خالص‌سازی اسیده‌های نوکلئیک، هضم با پروتیناز K معمولا در حضور EDTA برای مهار آنزیم‌های وابسته به یون فلزی مانند نوکلئازها انجام می‌شود.

افزایش فعالیت پروتئیناز K: نقش دمای واکنش و مواد افزودنی

این آنزیم در محدوده وسیعی از PH (‏۴ – ۱۲)‏ پایدار است ولی در PH=8 دارای فعالیت بهینه است. علاوه بر این، دمای بالای واکنش، افزودن SDS، گوانیدینیوم کلرید، گوانیدینیوم تیوسیانات و اوره، فعالیت پروتئیناز K را با در دسترس قرار دادن محل‌های برش سوبسترا، افزایش می‌دهد.

با این حال، دمای بالای ۶۵ درجه سانتیگراد و بازدارنده‌های خاص مانند تری trichloroacetic acid و سرین پروتئاز AEBSF، PMSF، یا DFP مانع از فعالیت آن می‌شوند.

مقاومت پروتئیناز K: یک ویژگی منحصر به فرد

پروتئیناز K توسط انواع ترکیبات از جمله Guanidinium chloride، Guanidinium thiocyanate، اوره، Sarkosyl، Triton X-100 Triton X-100، Tween 20، SDS، سیترات، iodoacetic acid، EDTA، یا دیگر بازدارنده‌های سرین پروتئاز مانند TLCK و TPCK مهار نمی‌شود. ​

خرید پروتئیناز k یک پیشنهاد ویژه برای شماست! محصولات قبلی ما که توسط مشتریان مورد استفاده قرار گرفته و با استقبال فراوانی روبرو شد. این محصول با کیفیت بالا و قیمت مناسب خود، می تواند رضایت شما را جلب کند.